厭氧培養箱置換時混合氣體調整好混合氣體鋼瓶所需壓力（鋼瓶上減壓閥的輸出壓力），一般為0.1左右。打開控制面板上的F3開關，同時打開真空泵開關，讓其抽走取樣室內的空氣。混合氣充入操作室內，以手套向外伸直為止（不能過多充入，為防止手套爆裂。），此時應關閉F3開關，然后打開F1和F2開關，使操作室內的氣過渡到取樣室內，直到手套向內伸直為止，為防止手套爆裂此時應關閉F1與F2的開關，這樣混合氣的置換完成了，重復以上方法，做5到6次，做完后，整個氣體的置換就完成了，這時操作室內就形成了厭氧環境，并關閉真空泵開關。打開F5，并調節面板上的穩流閥和流量計，使流量計的流量為10ml/min。直至實驗結束，關閉減壓閥和混合氣總閥。